可溶解性蛋白质是一种小分子的蛋白质,它可以溶解在水或其他溶剂中。在整个细胞生命过程中,可溶蛋白具有很强的调节作用。可溶蛋白在细胞中可以保水,具有防止水分的丢失,避免衰老的作用
植物可溶性蛋白的测定(考马斯亮蓝法)
考马斯亮蓝测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,在595nm有强的吸收。蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比,用于蛋白质的定量测定。
使用分光光度法来测定可溶性蛋白的含量,一定是需要做标准曲线的。使用分光光度法测定蛋白含量,一般是使用6个点来测定。标准品是100ug/ml的牛血清蛋白,分别取0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1.0ml,以1ml蒸馏水来作为空白,其他的用蒸馏水补齐到1ml。于是,我们就得到了6个蛋白浓度点:0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.10.然后,分别加入5ml考马斯亮蓝,加上瓶塞,混合均匀,放置2分钟后,在595nm下比色,测定不同浓度蛋白的吸光度,并绘制出标准曲线。
植物样本:新鲜样品需液氮速冻后-80℃保存,干样密封常温或冰袋运输;鲜样不低于2克,避免常温暴露。
动物样本:血液样本需添加抗凝剂并4℃静置30分钟,1300g离心力离心10分钟,转移上清至离心管并添加蛋白酶抑制剂。
唾液:用无菌容器收集,4℃ 2000g离心10分钟,0.22μm滤膜过滤后干冰运输。
通用要求
样本量:干样建议≥1克,鲜样≥2克。
运输方式:所有样本需干冰或液氮速冻,避免反复冻融。
时间要求:样本采集后应尽快处理并冻存,避免生物活性损失。