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HPLC测甘草酸有哪些要求

2025-09-17

一般采用HPLC的方法测定甘草酸含量,有标准品。

1.色谱条件

根据样品和目标化合物的性质,选择适当的色谱柱,将化合物分离出来,在流动相的冲洗作用下,到达检测器测定其峰值。因此,这个过程每个环节都会影响到最终的检测结果。通常情况下,是有标准的方法推荐,去验证和优化即可,也有的是需要自己开发的。比如,采用C18的色谱柱,柱温25℃,每个参数都是有依据的,不能凭空的。紫外检测器,波长250nm,化合物有强烈的特征吸收峰。

流动相可简单,也可以复杂,看具体的情况。甲醇+醋酸铵溶液+乙酸也可以参考一下,如果流动相选的不好,对出峰效果是影响比较大的。一般选择1.0ml/min的流速,每个参数的改变,对其他因素都会有影响,可谓牵一发而动全身,可见方法开发是不容易的事情。进样量10ul,可以手动也可以自动,如果进样量影响出峰,也可以进行必要的调整。

2.样品处理

就科研来说,有从中药材甘草中直接提取的。但很多情况下,是多种药材混合,从而指定测其中甘草酸的含量。

3.标准曲线

标准曲线,就是采用标准品梯度稀释的方式,至少6个浓度点。在上述的色谱条件下,上机测定对应的色谱峰。确保出峰的效果正常,根据色谱峰面积和对应浓度点的关系,可以绘制标准曲线,计算回归方程。计算回收率,确保相关系数r2>0.999,稳定性符合要求。检测限和定量限,也应有所计算。

4.计算结果

有了标准曲线的回归方程,样品的色谱峰面积,根据公式是可以计算出浓度的。其实,这里面还需要考虑样品的稀释倍数,回收率。


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