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叶绿素含量测定

2025-09-16

叶绿素是光合作用的关键色素,天然来源包括绿色植物、蓝绿藻、真核藻类(绿藻、褐藻等)等。富含叶绿素食物主要有绿叶蔬菜(菠菜、芥蓝、油麦菜、空心菜、韭菜、茼蒿、生菜等)、螺旋藻、海带、豆类及瓜果(荷兰豆、秋葵、西兰花、牛油果、青提等)、芦笋、苦瓜等。

叶绿素易受高温破坏,建议快炒或凉拌以减少营养流失。日常饮食中多样化搭配深绿色蔬菜,每日摄入300-500g深绿色蔬菜,过量容易引起腹泻等。叶绿素在人体内在一定程度上可消除自由基、减轻氧化应激对细胞的损伤,抗氧化活性是维生素E的200倍,同时抑制炎症因子的释放等。叶绿素分子和血红素相似,可刺激骨髓造血,改善贫血的状况。叶绿素能和黄曲霉毒素结合,减少肠道的吸收,降低对身体的损害。加速胆固醇的代谢,辅助调节血脂和血压。抑制有害细菌的滋生和繁殖,中和挥发性硫化物,改善便秘等。

常用的检测方法:分光光度法(叶绿素a波长663nm,叶绿素b波长645nm),高效液相色谱(HPLC)。

1.分光光度法

选择新鲜的植物叶片,用蒸馏水清洗干净,去除中脉并剪碎。放入研钵中,加入5ml的80%丙酮和少量碳酸钙(防止叶绿素降解)研磨成匀浆。转移到离心管,避免浸泡48小时或4℃过夜。3000r/min离心10min,取上清液作为叶绿素提取液。取1ml提取液加3ml的80%丙酮稀释,摇匀,用80%丙酮作为对照,测定吸光度值。根据提取液体积、稀释倍数及样品质量,计算单位鲜重叶绿素含量(mg/g)。

2.高效液相色谱(HPLC)

使用反相色谱柱C18(250mmx4.6mm,5um),流动相用甲醇和水,梯度洗脱,用0.1%甲酸来改善峰形。柱温30℃,DAD检测器,波长395nm。流速1ml/min左右,进样量10uL。梯度洗脱的程序,一般可以从100%甲醇开始,5-15分钟后降低到50%-60%,继续降低到20-30%,结束的时候恢复到初始比例。这个洗脱程序需要微调,根据实际出峰情况进行。

叶绿素是弱极性的,难溶于水,但溶于甲醇、乙醇、丙酮等弱极性溶剂或非极性溶剂。因此,洗脱的程序主要是靠有机相来洗脱。


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